PLIC-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408872-ACT

UBQLN1 codifica a ubiquilina-1 (PLIC-1), um adaptador do tipo ubiquitina/associado à ubiquitina que acopla substratos poliubiquitinados ao proteassoma 26S e ajuda a manter a homeostase proteica. A PLIC-1 participa da proteólise dependente de ubiquitina, da degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD) e de vias de proteostase responsivas ao estresse, influenciando a renovação de proteínas mal dobradas ou propensas à agregação. Por seus papéis no controle de qualidade e no tráfego de proteínas, UBQLN1 é frequentemente estudado no contexto da agregação proteica em doenças neurodegenerativas e de fenótipos celulares relacionados ao estresse. Alterações na função ou na expressão de UBQLN1 também têm sido associadas à proteostase desregulada em ambientes de sinalização relevantes para câncer e inflamação, sustentando seu uso em pesquisas focadas em vias e mecanismos.

PLIC-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UBQLN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PLIC-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UBQLN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UBQLN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PLIC-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UBQLN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PLIC-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PLIC-1 em células tumorais com expressão de UBQLN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.