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plakophilin 2双切口酶质粒(m) | sc-426568-NIC | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Pkp2 基因编码桥粒斑蛋白 2(plakophilin 2),这是一种含臂重复序列(armadillo repeats)的蛋白,定位于桥粒,在承受机械应力的组织中协调细胞间连接的组装与稳定。桥粒斑蛋白 2 支持桥粒芯糖蛋白/桥粒连接蛋白(desmoglein/desmocollin)复合体的组织,并将连接处组分与中间丝网络相连接,从而影响细胞—细胞黏附、组织完整性以及细胞骨架动力学。通过其在连接信号传导与力学信号转导(mechanotransduction)中的作用,PKP2 与调控上皮结构及心脏传导特性的通路发生交叉。PKP2 功能异常与桥粒功能障碍及致心律失常性心肌病表型相关,因此适用于心脏重构、连接生物学以及应激诱导的组织失效机制等研究。
plakophilin 2 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Pkp2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Pkp2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Pkp2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Pkp2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。