plakophilin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422275
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- plakophilin 1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico plakophilin 1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:plakophilin 1 Anticorpo (10B2): sc-33636
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
plakophilin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422275 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Pkp1 codifica a plakofilina 1, uma proteína com repetições do tipo armadillo que atua como componente central dos desmossomos, ligando as caderinas desmossomais às redes de filamentos intermediários para sustentar a adesão célula–célula epitelial e a integridade tecidual. Em camundongos, a plakofilina 1 contribui para a montagem e a estabilização dos desmossomos, coordenando o remodelamento das junções com a organização do citoesqueleto e a mecanotransdução. A perturbação da adesão dependente de PKP1 afeta a formação da barreira epidérmica e a resistência ao estresse, processos frequentemente estudados na biologia da pele e de epitélios estratificados. Como a disfunção desmossomal influencia a diferenciação, a resposta a ferimentos e a homeostase epitelial, Pkp1 é relevante para investigar patologias associadas à adesão e redes de sinalização das junções.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO plakophilin 1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pkp1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pkp1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pkp1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína plakophilin 1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pkp1 para a investigação da sinalização de plakophilin 1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pkp1 críticos para a função plakophilin 1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pkp1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo plakophilin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo plakophilin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pkp1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo plakophilin 1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR plakophilin 1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pkp1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pkp1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.