PLA2R Double Nickaseプラスミド (h): sc-411636-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PLA2R Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PLA2Rダブルニカースプラスミド（h）およびPLA2Rダブルニカースプラスミド（h2）は、PLA2R1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PLA2R Double Nickaseプラスミド (h) | sc-411636-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PLA2R Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-411636-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PLA2R1は、M型ホスホリパーゼA2受容体（PLA2R）をコードします。PLA2Rは、分泌型ホスホリパーゼA2酵素やその他の細胞外リガンドに結合する、単回膜貫通型のC型レクチンファミリー分子であり、受容体介在性エンドサイトーシス、リガンドのクリアランス、および下流シグナル伝達の制御に関与します。PLA2Rは細胞外の認識ドメインを介して、炎症性脂質メディエーター経路や、膜リモデリングおよび酸化ストレスに関連する細胞応答に影響を及ぼします。PLA2R1の発現や受容体のターンオーバーは、免疫関連の組織障害や臓器特異的な炎症と関連づけられており、疾患に関連する状況で受容体—リガンド動態を研究するための分子的な入り口としての有用性が示唆されています。腎臓生物学においては、PLA2Rは自己免疫性の糸球体疾患における主要な抗原標的であるため、PLA2R1の改変は、抗原提示、抗体結合、細胞ストレス応答の機序研究に有用です。
PLA2R ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PLA2R1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PLA2R1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PLA2R1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PLA2R1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。