Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
PKC epsilon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400358
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PKC epsilon O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PKC epsilon, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PKC epsilon Anticorpo (E-5): sc-1681
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PKC epsilon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400358 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
PRKCE codifica a proteína quinase C épsilon (PKCε), uma quinase de serina/treonina responsiva ao diacilglicerol que transmite sinais a jusante de vias de GPCR e de receptores tirosina-quinase. A PKCε regula redes de fosforilação que controlam a sobrevivência celular, a proliferação, a remodelação do citoesqueleto e a migração direcionada, com papéis de destaque na sinalização MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF-κB e de adesão focal. Em células humanas, a PKCε também influencia o tráfego de vesículas e as respostas ao estresse mitocondrial, conectando a sinalização por segundos mensageiros à adaptação metabólica. A atividade e a expressão desreguladas de PRKCE/PKCε têm sido associadas a fenótipos oncogênicos, mecanismos de resistência a terapias e alterações na sinalização inflamatória, tornando-o um alvo comum em estudos de mapeamento de vias e genômica funcional.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PKC epsilon (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PRKCE em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PRKCE, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PRKCE na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PKC epsilon.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PRKCE para a investigação da sinalização de PKC epsilon, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PRKCE críticos para a função PKC epsilon
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PRKCE para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PKC epsilon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PKC epsilon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PRKCE. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PKC epsilon Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PKC epsilon (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PRKCE para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PRKCE definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.