Plasmide CRISPR/Cas9 KO PKC epsilon (h): sc-400358

Présentation

PRKCE code la protéine kinase C epsilon (PKCε), une sérine/thréonine kinase sensible au diacylglycérol qui transmet des signaux en aval des voies des GPCR et des récepteurs à activité tyrosine kinase. PKCε régule des réseaux de phosphorylation contrôlant la survie cellulaire, la prolifération, le remodelage du cytosquelette et la migration dirigée, avec des rôles marqués dans les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF-κB et la signalisation des adhésions focales. Dans les cellules humaines, PKCε influence également le trafic vésiculaire et les réponses au stress mitochondrial, reliant la signalisation par seconds messagers à l’adaptation métabolique. Une activité et une expression dérégulées de PRKCE/PKCε ont été associées à des phénotypes oncogéniques, à des mécanismes de résistance aux thérapies et à une signalisation inflammatoire altérée, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée dans les travaux de cartographie des voies et de génomique fonctionnelle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PKC epsilon (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRKCE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRKCE, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRKCE à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PKC epsilon.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRKCE pour l'étude de la signalisation de PKC epsilon, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRKCE essentiels à la fonction de PKC epsilon
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRKCE pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PKC epsilon plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PKC epsilon plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRKCE. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PKC epsilon plasmide HDR (h) et le PKC epsilon (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRKCE pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRKCE définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.