PKC beta Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400263-LAC

PRKCB codifica la proteina chinasi C beta (PKCβ), una chinasi serina/treonina sensibile al diacilglicerolo e al Ca²⁺ che collega la segnalazione della fosfolipasi C indotta dai recettori a programmi di fosforilazione che controllano proliferazione, differenziamento, migrazione e sopravvivenza. PKCβ agisce a valle dei recettori dell’antigene e dei recettori Fc, contribuendo a modellare l’attivazione delle cellule B e la segnalazione dell’immunità innata, e modula inoltre le risposte endoteliali e piastriniche attraverso la regolazione della dinamica del citoscheletro e della secrezione. In ambito oncologico, la segnalazione dipendente da PRKCB interseca gli output delle vie MAPK/ERK, NF-κB e PI3K, che influenzano le transizioni di stato cellulare e le risposte allo stress; la sua deregolazione è stata anche associata a fisiopatologia infiammatoria e vascolare. Queste caratteristiche rendono PRKCB un nodo utile per indagare i meccanismi di trasduzione del segnale, il crosstalk tra vie dipendente dalla fosforilazione e programmi trascrizionali specifici del contesto in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale PKC beta (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PRKCB in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PKC beta (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PRKCB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PKC beta. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PRKCB e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.