Plásmido CRISPR de Activación (h) PIWIL1: sc-418611-ACT

PIWIL1 (proteína 1 tipo PIWI) es un miembro de la familia Argonaute enriquecido en la línea germinal que se une a los ARN interactuantes con PIWI (piRNA) para guiar el silenciamiento específico de secuencia de elementos transponibles y regular la estabilidad del ARN. A través de las vías de biogénesis de piRNA y de represión epigenética, PIWIL1 contribuye al mantenimiento de la integridad del genoma, la regulación de la cromatina y el desarrollo de las células germinales. Se ha descrito una expresión desregulada de PIWIL1 en múltiples tipos de tumores y con frecuencia se investiga por sus posibles funciones en programas tipo célula madre, proliferación y redes de ARN pequeños alteradas. Como resultado, PIWIL1 se utiliza ampliamente como modelo para estudiar la biología de la vía de piRNA, el control de transposones y la regulación génica mediada por ARN en células humanas.

PIWIL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PIWIL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PIWIL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PIWIL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PIWIL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PIWIL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PIWIL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PIWIL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PIWIL1 en células tumorales con expresión de PIWIL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.