PiT1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-422988-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PiT1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PiT1ダブルニカースプラスミド（m）およびPiT1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Slc20a1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PiT1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-422988-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスSlc20a1は、III型ナトリウム依存性リン酸トランスポーターであるPiT1をコードしており、ヌクレオチド合成、リン脂質代謝、ならびに細胞のバイオエネルギー維持を支える無機リン酸の取り込みを媒介する、広く発現する膜タンパク質である。PiT1はリン酸の利用可能性を細胞周期の進行や生存シグナルと統合し、さまざまな細胞種において増殖制御やストレス応答との関連が示されている。リン酸恒常性に加えて、PiT1は石灰化に関連する過程や、代謝・発生経路と交差するリン酸駆動性シグナル伝達ネットワークにも寄与する。リン酸輸送およびPiT1関連経路の破綻は、石灰化生物学、代謝リモデリング、ならびに疾患関連モデル系における増殖性表現型の研究において重要である。
PiT1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Slc20a1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Slc20a1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Slc20a1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Slc20a1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。