PIRT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416125-ACT

ヒトPIRT（phosphoinositide-interacting regulator of TRP channels）は、ホスファチジルイノシトール4,5-ビスリン酸（PIP2）に結合し、一部のTRP（transient receptor potential）イオンチャネルの活性を調節する小型の膜結合タンパク質をコードしています。PIRTは、TRP依存的なカルシウムおよび陽イオンのフラックスを制御することで、侵害受容、温度感受、かゆみなどの感覚シグナル伝達に寄与し、膜リン脂質（ホスホイノシチド）ダイナミクスと神経の興奮性を結び付けます。PIRTに関連するシグナルは、GPCRや脂質によるチャネルゲーティングを司る経路と交差し、下流のセカンドメッセンジャー応答や、活動依存的な転写プログラムにも影響します。TRPチャネル調節やホスホイノシチドシグナルの変調は、疼痛や神経炎症の表現型に関与することが示唆されており、PIRTは感覚ニューロン生物学および関連疾患モデルにおける機序解析の有用な結節点となります。

PIRT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PIRTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PIRT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PIRT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPIRT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PIRTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPIRT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPIRT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPIRT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPIRT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。