PIEZO1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410555-ACT

PIEZO1は、大型の機械感受性カチオンチャネルをコードしており、膜張力やずり応力をカルシウム流入へと変換することで、細胞が機械的刺激を生化学的シグナルに変換（メカノトランスダクション）できるようにします。血管緊張とリモデリング、赤血球の体積制御、上皮・内皮におけるメカノトランスダクション、免疫細胞の活性化などの基本的なプロセスを制御し、その下流ではカルモジュリンシグナル、細胞骨格の再編成、YAP/TAZ関連の転写プログラムといったカルシウム依存性経路に影響を及ぼします。PIEZO1活性の変化は、赤血球の水分量や形態の異常に関わる疾患、ならびに心血管系およびリンパ系の生物学におけるメカノトランスダクションの破綻と関連しています。これらの特性からPIEZO1は、機械的力が細胞運命の決定、バリア機能、組織恒常性をどのように形作るかを研究するうえで重要な標的です。

PIEZO1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PIEZO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PIEZO1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PIEZO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPIEZO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PIEZO1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPIEZO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPIEZO1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPIEZO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPIEZO1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。