PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401991

概要

PIK3R2は、クラスIAホスホイノシチド3-キナーゼ（PI3K）のp85β制御サブユニットをコードしており、p110触媒サブユニットを安定化・調節するとともに、活性化した受容体型チロシンキナーゼやアダプタータンパク質をPI3Kシグナル伝達へと橋渡しします。PIP3産生の制御を介して、PI3キナーゼp85βは、細胞増殖、代謝、生存、細胞骨格ダイナミクスを調節するAKT–mTORおよび関連経路を統括します。PI3K経路の制御異常は、がん化シグナル、インスリン／IGF応答、免疫細胞機能に広く関与していることが示されています。p85βは基礎状態および刺激依存的なPI3K活性の双方に影響するため、シグナル伝達のフィードバック、経路間クロストーク、ネットワークの再配線といった文脈でしばしば研究対象となります。

PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPIK3R2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PIK3R2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PIK3R2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PI 3-kinase p85βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PI 3-kinase p85βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PIK3R2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PI 3-kinase p85βの機能に不可欠なPIK3R2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PIK3R2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PIK3R2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PI 3-kinase p85β HDRプラスミド（h）および PI 3-kinase p85β HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPIK3R2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPIK3R2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。