PI 3-kinase C2β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402519-ACT

PIK3C2B codifica a fosfatidilinositol-4-fosfato 3-quinase C2β (PI3K-C2β), uma quinase lipídica de classe II que gera sinais de fosfoinositídeos importantes para a dinâmica de membranas e o tráfego intracelular. Por meio da regulação dos reservatórios de fosfatidilinositol 3-fosfato e fosfatidilinositol (3,4)-bisfosfato, a PI3K-C2β influencia a endocitose, o transporte vesicular, a remodelação do citoesqueleto e desfechos de sinalização relacionados a PI3K/AKT que dependem do contexto. Alterações na expressão ou na atividade de PIK3C2B têm sido associadas a uma sinalização de fatores de crescimento desregulada e a fenótipos invasivos em diversos modelos experimentais de câncer, e o gene é estudado em vias ligadas ao metabolismo e às respostas celulares ao estresse. Essas características tornam PIK3C2B um alvo útil para dissecar o controle, mediado por fosfoinositídeos, da sinalização e de processos associados à membrana em células humanas.

PI 3-kinase C2β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIK3C2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PI 3-kinase C2β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIK3C2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIK3C2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PI 3-kinase C2β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIK3C2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PI 3-kinase C2β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PI 3-kinase C2β em células tumorais com expressão de PIK3C2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.