phostensin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407125

Übersicht

PPP1R18 kodiert Phostensin, eine aktinassoziierte regulatorische Untereinheit, die dazu beiträgt, die Aktivität der Proteinphosphatase 1 (PP1) am kortikalen Zytoskelett zu lokalisieren. Indem Phostensin PP1 an filamentöses Aktin koppelt, trägt es zur Kontrolle der Aktinfilament-Dynamik, der Zellform und der adhäsionsabhängigen Signalübertragung bei – mit nachgelagerten Effekten auf Zellmotilität und die Funktion von Immunzellen. Diese PP1-Scaffold-Funktion verknüpft PPP1R18 mit phosphorylierungsabhängigen Umbauprozessen, die die Organisation des Zytoskeletts und membrannahe Signalkomplexe koordinieren. Eine Fehlregulation der Phosphatase-Targeting-Mechanismen und des Aktin-Remodelings ist häufig relevant für Migrations- und Invasionsphänotypen von Krebszellen sowie für entzündliche und immunassoziierte Prozesse.

Das phostensin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PPP1R18-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PPP1R18-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PPP1R18 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die phostensin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PPP1R18-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der phostensin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PPP1R18-Exone abzielen, die für die phostensin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PPP1R18-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom phostensin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom phostensin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PPP1R18-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das phostensin HDR-Plasmid (h) und phostensin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PPP1R18-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PPP1R18-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.