Phocein Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418293

Panoramica

MOB4 codifica la proteina umana phocein, un componente di impalcatura (scaffold) conservato, implicato nella regolazione della segnalazione della via Hippo attraverso l’associazione con complessi legati a STRIPAK/PP2A e con reti correlate di chinasi serina/treonina. Phocein contribuisce al coordinamento della polarità cellulare, dell’organizzazione del citoscheletro e dei processi di traffico vescicolare che influenzano proliferazione e migrazione. Tramite questi hub di segnalazione, MOB4 è stato collegato al controllo della crescita tissutale e di nodi di segnalazione responsivi allo stress, spesso alterati in vie associate al cancro. L’analisi della funzione di phocein supporta studi meccanicistici sul crosstalk tra vie che influenzano l’attività di YAP/TAZ, le dinamiche di fosforilazione e decisioni di destino cellulare dipendenti dal contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Phocein (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MOB4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MOB4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MOB4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Phocein.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MOB4 per lo studio della segnalazione di Phocein, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MOB4 critici per la funzione di Phocein
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MOB4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Phocein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Phocein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MOB4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Phocein Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Phocein (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MOB4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MOB4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.