PHF5A Double Nickase Plasmid (h): sc-407986-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PHF5A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PHF5A Double-Nickase-Plasmid (h) und PHF5A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PHF5A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PHF5A Double Nickase Plasmid (h) | sc-407986-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PHF5A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407986-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PHF5A (PHD-Finger-Protein 5A) ist eine evolutionär konservierte Komponente des SF3b-Subkomplexes des U2-snRNP und fungiert als entscheidender Adapter bei der Prä-mRNA-Spleißung sowie der Erkennung von Spleißstellen während der frühen Spleißosomenassemblierung. Durch die Stabilisierung von Interaktionen in der Branchpoint-Region unterstützt PHF5A die präzise Entfernung von Introns und beeinflusst alternative Spleißprogramme, die den Zellzyklus, DNA-Schadensantworten und Differenzierungszustände mitbestimmen. Eine dysregulierte Funktion des Spleißosoms und Abhängigkeiten von Spleißfaktoren sind wiederkehrende Merkmale proliferierender und stressadaptierter Zellsysteme, weshalb PHF5A einen nützlichen Angriffspunkt zur Untersuchung der Kontrolle der RNA-Prozessierung darstellt. Eine Störung von PHF5A wurde mit einer veränderten Balance von Transkript-Isoformen und einer nachgeschalteten Umgestaltung von Signalwegen in Verbindung gebracht, was für Modelle genomischer Instabilität und onkogener Signalübertragung relevant ist.
PHF5A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PHF5A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PHF5A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PHF5A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PHF5A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.