PHF5A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407986

Übersicht

PHF5A (PHD-Finger-Protein 5A) ist ein essenzieller Bestandteil des SF3b-Subkomplexes innerhalb des U2-snRNP, wo es die Erkennung von Branchpoint-Sequenzen unterstützt und zur Festlegung der Spleißstellenwahl während des prä-mRNA-Spleißens beiträgt. Über seine Rolle bei der Assemblierung des Spleißosoms und der Dynamik des Spleißosoms beeinflusst PHF5A die Vielfalt von Transkript-Isoformen und gewährleistet effiziente Genexpressionsprogramme, die mit Zellzyklusprogression und Genomerhalt verknüpft sind. Eine Störung der PHF5A-Funktion kann weitreichende Spleißdefekte auslösen, darunter aberrante Exonnutzung und Intronenretention, wodurch Proteostase- und Stressantwortwege umgestaltet werden. Fehlregulierte Spleißosom-Komponenten, einschließlich PHF5A, werden häufig im Kontext von Krebserkrankungen und anderen Störungen untersucht, die durch veränderte RNA-Prozessierung und transkriptionelle Anpassung gekennzeichnet sind.

Das PHF5A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PHF5A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PHF5A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PHF5A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PHF5A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PHF5A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PHF5A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PHF5A-Exone abzielen, die für die PHF5A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PHF5A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PHF5A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PHF5A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PHF5A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PHF5A HDR-Plasmid (h) und PHF5A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PHF5A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PHF5A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.