PFKFB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404532

概要

PFKFB3は、6-ホスホフルクト-2-キナーゼ／フルクトース-2,6-ビスホスファターゼ3をコードしており、細胞内フルクトース-2,6-ビスリン酸量を制御することでホスホフルクトキナーゼ-1の活性と解糖系フラックスを調節する二機能性酵素である。ヒト細胞では、PFKFB3は高速度の解糖系を支えるとともに、増殖因子シグナル、栄養状態、ストレス応答に応じた代謝適応を統合し、糖代謝を細胞周期の進行や生合成需要と結び付けている。その活性は低酸素やオンコジーンに関連するプログラムとも交差し、代謝リプログラミングが増殖、遊走、炎症性シグナルに影響する状況で研究されてきた。PFKFB3の発現異常や解糖制御の破綻は、がん代謝や血管細胞・免疫細胞の活性化など、複数の疾患関連モデルで報告されている。

PFKFB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPFKFB3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PFKFB3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PFKFB3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PFKFB3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PFKFB3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PFKFB3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PFKFB3の機能に不可欠なPFKFB3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PFKFB3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PFKFB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPFKFB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PFKFB3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PFKFB3 HDRプラスミド（h）および PFKFB3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPFKFB3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPFKFB3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。