Plasmide CRISPR/Cas9 KO PFKFB3 (h): sc-404532

Présentation

PFKFB3 code la 6‑phosphofructo‑2‑kinase/fructose‑2,6‑bisphosphatase 3, une enzyme bifonctionnelle qui contrôle les niveaux intracellulaires de fructose‑2,6‑bisphosphate afin d’ajuster l’activité de la phosphofructokinase‑1 et le flux glycolytique. Dans les cellules humaines, PFKFB3 soutient une glycolyse à haut débit et coordonne l’adaptation métabolique aux signaux des facteurs de croissance, à la disponibilité en nutriments et aux réponses au stress, reliant le métabolisme des glucides à la progression du cycle cellulaire et aux besoins biosynthétiques. Son activité recoupe des programmes associés à l’hypoxie et aux oncogènes et a été étudiée dans des contextes où la reprogrammation métabolique influence la prolifération, la migration et la signalisation inflammatoire. Une expression dérégulée de PFKFB3 et un contrôle altéré de la glycolyse ont été rapportés dans plusieurs modèles pertinents pour la maladie, notamment le métabolisme tumoral et l’activation vasculaire ou des cellules immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PFKFB3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PFKFB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PFKFB3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PFKFB3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PFKFB3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PFKFB3 pour l'étude de la signalisation de PFKFB3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PFKFB3 essentiels à la fonction de PFKFB3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PFKFB3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PFKFB3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PFKFB3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PFKFB3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PFKFB3 plasmide HDR (h) et le PFKFB3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PFKFB3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PFKFB3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.