Perlecan CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420986-ACT

マウスのHspg2は、基底膜および細胞周囲マトリックスに存在する大型ヘパラン硫酸プロテオグリカンであるパールカン（perlecan）をコードしており、細胞外マトリックス（ECM）の構築を組織化し、細胞―マトリックス間シグナル伝達を調節します。パールカンはFGFやVEGFなどの増殖因子に結合し、インテグリンや他のプロテオグリカンと協調して、接着、遊走、メカノトランスダクション、血管新生応答を制御します。これにより、FGF/FGFR、VEGF/VEGFR、PI3K–AKT/ERKシグナル伝達などの経路に影響を及ぼします。発生および組織恒常性の維持において、パールカンは軟骨と血管の完全性、神経筋接合部の構築、ならびに濾過バリア機能に寄与します。Hspg2/パールカンの生物学的機能の破綻は、前臨床疾患モデルにおいて基底膜疾患、骨格異形成、腫瘍微小環境のリモデリングと関連づけられており、ECMおよびシグナル伝達研究における重要な標的となっています。

Perlecan CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Hspg2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Perlecan CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Hspg2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHspg2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Perlecanの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHspg2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPerlecan依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHspg2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPerlecan経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。