Peripherin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401335-ACT

PRPH codifica a periferina, uma proteína de filamento intermediário do tipo III, enriquecida em neurónios periféricos, que contribui para a arquitetura do citoesqueleto e para a integridade axonal. A periferina participa na montagem e na remodelação de filamentos intermediários que sustentam a extensão de neuritos, o transporte axonal e as respostas ao stress celular durante a diferenciação e a regeneração neuronais. A sua expressão é frequentemente utilizada como marcador do desenvolvimento do sistema nervoso periférico e da reprogramação associada a lesões. A desregulação da expressão de PRPH e da organização dos filamentos tem sido associada a processos neurodegenerativos e à vulnerabilidade dos neurónios motores, reforçando a sua relevância em estudos mecanísticos de disfunção neuronal.

Peripherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRPH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Peripherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRPH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRPH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Peripherin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRPH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Peripherin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Peripherin em células tumorais com expressão de PRPH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.