Pendrin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401272-ACT

ヒトSLC26A4は、上皮膜を介して塩化物イオン、ヨウ化物イオン、重炭酸イオン、チオシアン酸イオンを輸送する多回膜貫通型の陰イオン交換輸送体ペンドリンをコードする。ペンドリンは内耳、甲状腺、腎臓におけるイオンおよびpHの恒常性維持に寄与し、上皮の輸送プログラムを全身の電解質バランスと結び付けている。甲状腺では、ヨウ化物の取り扱いに重要な頂端膜側へのヨウ化物排出を支える一方、腎臓の介在細胞では、酸塩基調節に関与する重炭酸／塩化物交換を調節する。SLC26A4活性の異常は遺伝性難聴や甲状腺関連の表現型と関連しており、上皮輸送の機構研究、発生生物学、ならびに遺伝子型‐表現型相関の解析に有用な標的である。

Pendrin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC26A4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Pendrin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC26A4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC26A4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Pendrinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC26A4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPendrin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC26A4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPendrin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。