Peg10 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406028-LAC

Il gene umano **PEG10** codifica **Peg10**, una proteina di tipo gag/pol derivata da un retrotrasposone domesticato, che favorisce il legame all’RNA e la regolazione post-trascrizionale, con ruoli di primo piano nella crescita cellulare, nella sopravvivenza e nei programmi di lineage. L’attività di Peg10 si intreccia con la proteostasi mediata dall’ubiquitina, il controllo del ciclo cellulare e le reti di segnalazione che modellano proliferazione e differenziamento, anche in contesti come lo sviluppo placentare. Un’espressione deregolata di PEG10 è stata associata a soglie apoptotiche alterate e a fenotipi invasivi in molteplici modelli rilevanti per la malattia, rendendolo un nodo utile per lo studio del controllo trascrizionale e delle risposte allo stress oncogenico. Nella ricerca biomedica, PEG10 rappresenta un bersaglio gestibile per indagare gli effetti dell’attivazione di geni endogeni sullo stato cellulare, sull’ingaggio delle vie di segnalazione e sul rimodellamento trascrittomico a valle.

Le particelle di attivazione lentivirale Peg10 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PEG10 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Peg10 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PEG10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Peg10. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PEG10 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.