PDP2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406956

Visão geral

A fosfatase da desidrogenase do piruvato, subunidade catalítica 2 (PDP2), é uma enzima mitocondrial que desfosforila e ativa o complexo desidrogenase do piruvato (PDH), promovendo assim a conversão de piruvato em acetil-CoA e coordenando a entrada do carbono derivado da glicólise no ciclo do TCA (ciclo do ácido cítrico). Ao ajustar a atividade da PDH, a PDP2 contribui para a flexibilidade metabólica, o equilíbrio redox e a homeostase energética celular, conectando a disponibilidade de nutrientes ao metabolismo oxidativo. A regulação alterada do eixo PDH–PDP está associada à reprogramação metabólica observada em distúrbios que afetam a função mitocondrial e em contextos de utilização anormal de glicose e lipídios, tornando a PDP2 um nó útil para estudar a bioenergética mitocondrial. A PDP2 também oferece uma via para investigar entradas de sinalização que modulam o estado de fosforilação da PDH e processos a jusante dependentes de acetil-CoA.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PDP2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PDP2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PDP2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PDP2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PDP2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PDP2 para a investigação da sinalização de PDP2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PDP2 críticos para a função PDP2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PDP2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PDP2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PDP2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PDP2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PDP2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PDP2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PDP2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PDP2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.