PDGF Receptor beta/PDGFRB Plasmide Double Nickase (m): sc-422171-NIC

Il gene murino *Pdgfrb* codifica il recettore beta del fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGFRB), una tirosin-chinasi recettoriale che regola la proliferazione, la migrazione e la sopravvivenza dei periciti e delle cellule muscolari lisce vascolari durante la maturazione dei vasi e il rimodellamento tissutale. In seguito al legame del ligando PDGF, PDGFRB attiva le cascate di segnalazione canoniche PI3K–AKT, RAS–MAPK e PLCγ e coordina la dinamica del citoscheletro e le interazioni con la matrice extracellulare tramite proteine adattatrici a valle. Nel sistema vascolare in sviluppo e in quello adulto, la segnalazione mediata da PDGFRB sostiene l’integrità della barriera emato-encefalica, la riparazione delle ferite e il crosstalk tra stroma e sistema immunitario. Un’attività di PDGFRB deregolata è frequentemente utilizzata come readout molecolare in studi su angiogenesi, fibrosi, rimodellamento infiammatorio e biologia dello stroma associato al tumore in modelli murini.

PDGF Receptor beta/PDGFRB Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pdgfrb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pdgfrb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pdgfrb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pdgfrb interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.