Pdcd-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401743-ACT

PDCD4 codifica a Pdcd-4, uma proteína do tipo supressora tumoral que modula a tradução ao interagir com fatores de iniciação e helicases de RNA, influenciando assim a síntese de proteínas específica de mRNAs e o controle do crescimento celular. A Pdcd-4 é regulada por degradação dependente de fosforilação, o que a conecta às entradas de sinalização PI3K–AKT–mTOR e MAPK que acoplam sinais extracelulares à reprogramação translacional. Alterações na expressão de PDCD4 têm sido associadas à desregulação da proliferação, invasão e respostas ao estresse em múltiplos contextos relevantes para o câncer, e o gene é frequentemente estudado como um nó que conecta a regulação por microRNAs, a apoptose e a sinalização inflamatória. Em células humanas, a perturbação de PDCD4 fornece um modelo tratável para dissecar como o controle translacional molda vias oncogênicas e respostas adaptativas.

Pdcd-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDCD4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pdcd-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDCD4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDCD4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pdcd-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDCD4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pdcd-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pdcd-4 em células tumorais com expressão de PDCD4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.