Pdcd-1 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-403008-LAC-2

Das humane Gen PDCD1 kodiert den inhibitorischen Immun-Checkpoint-Rezeptor PD-1 (Pdcd-1), ein Typ-I-Membranprotein, das auf aktivierten T-Zellen, B-Zellen und Untergruppen myeloider Zellen exprimiert wird und die Antigenrezeptor-Signalübertragung begrenzt, um die periphere Toleranz aufrechtzuerhalten. Nach Bindung an PD-L1 oder PD-L2 rekrutiert PD-1 über seine ITIM/ITSM-Motive die Phosphatase SHP2, um die proximalen TCR/CD28-Signale abzuschwächen, wodurch die Aktivität der PI3K–AKT- und RAS–MAPK-Signalwege eingeschränkt und Transkriptionsprogramme, die mit Effektorfunktion, Stoffwechsel und Erschöpfung verbunden sind, neu ausgerichtet werden. Eine dysregulierte PDCD1-Expression oder -Signalgebung ist mit chronischen Infektionen und tumorassoziierter Immundysfunktion sowie mit Autoimmunität verbunden, was seine zentrale Rolle bei der Balance zwischen Immunaktivierung und -suppression widerspiegelt. Geneditierung und Perturbationsstudien, die auf PDCD1 abzielen, ermöglichen die mechanistische Aufschlüsselung der Checkpoint-Signalgebung, von Entscheidungen über das Schicksal von Immunzellen und von ligandenabhängigen inhibitorischen Netzwerken in primären humanen Lymphozyten und in entwickelten In-vitro-Modellen.

Pdcd-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PDCD1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Pdcd-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PDCD1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Pdcd-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PDCD1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.