Pdcd-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-403008-LAC-2

O PDCD1 humano codifica o receptor inibitório de checkpoint imunológico PD-1 (Pdcd-1), uma proteína de membrana do tipo I expressa em células T ativadas, células B e subpopulações de células mieloides, que restringe a sinalização do receptor de antígeno para manter a tolerância periférica. Após a ligação a PD-L1 ou PD-L2, o PD-1 recruta a fosfatase SHP2 por meio de seus motivos ITIM/ITSM para atenuar a sinalização proximal de TCR/CD28, limitando a atividade das vias PI3K–AKT e RAS–MAPK e remodelando programas transcricionais ligados à função efetora, ao metabolismo e à exaustão. A expressão ou sinalização desregulada de PDCD1 está associada à disfunção imune relacionada a infecções crônicas e tumores, bem como à autoimunidade, refletindo seu papel central no equilíbrio entre ativação e supressão imunológica. Estudos de edição gênica e de perturbação direcionados a PDCD1 permitem a dissecação mecanística da sinalização de checkpoint, das decisões de destino de células imunes e de redes inibitórias dependentes de ligante em linfócitos humanos primários e em modelos in vitro engenheirados.

As Partículas de Ativação Lentivirais Pdcd-1 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PDCD1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Pdcd-1 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PDCD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Pdcd-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PDCD1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.