PCTAIRE-3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422147-ACT

Cdk18 は、セリン／スレオニンキナーゼである PCTAIRE-3 をコードしており、細胞周期に関連するシグナル伝達を、細胞骨格および膜輸送（トラフィッキング）過程と協調させる役割に関与するとされる、サイクリン依存性キナーゼ関連ファミリーの一員です。マウス細胞では、PCTAIRE-3 活性が細胞増殖、分化プログラムの制御、ならびにキナーゼカスケードと転写出力を統合するストレス応答性シグナル伝達ノードの調節に関連づけられています。他の非典型的 CDK と同様に、発現量やシグナルの文脈が変化すると、チェックポイント制御や細胞生存への影響を介して、組織恒常性、神経系または生殖細胞系列の発生、さらにはがん化表現型に関わる経路へ影響を及ぼし得ます。これらの特性により、Cdk18 はキナーゼネットワークの配線や、増殖・分化の文脈依存的な制御を解明するための有用な標的となります。

PCTAIRE-3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cdk18の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PCTAIRE-3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cdk18 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCdk18転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PCTAIRE-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCdk18遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPCTAIRE-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCdk18発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPCTAIRE-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。