PCGF3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405260

概要

PCGF3（polycomb group ring finger 3）は、非カノニカルなPolycomb抑制複合体1（PRC1）の中核構成要素であり、RING1A/RING1Bと協調してE3ユビキチンリガーゼとして機能し、ヒストンH2Aのモノユビキチン化（H2AK119ub）を触媒します。この活性を通じてPCGF3は、Polycombによる転写抑制、エピジェネティック記憶、ならびにクロマチンの凝縮に寄与し、発生過程における遺伝子発現プログラムや細胞運命決定の協調に役立ちます。PCGF3を含むPRC1複合体は、Polycomb/Trithoraxのバランスや、PRC2依存的なH3K27メチル化とのクロストークを含む、より広範なクロマチン制御ネットワークとも相互に関わります。Polycombシグナル伝達やPRC1サブユニット組成の破綻は、がんなどエピジェネティックな病因をもつ疾患で観察される異常な遺伝子サイレンシングや転写リプログラミングにしばしば関与するため、ヒト細胞におけるPCGF3機能の機序解明研究が促進されています。

PCGF3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPCGF3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PCGF3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PCGF3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PCGF3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PCGF3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PCGF3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PCGF3の機能に不可欠なPCGF3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PCGF3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PCGF3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPCGF3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PCGF3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PCGF3 HDRプラスミド（h）および PCGF3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPCGF3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPCGF3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。