Pax-2 Plasmide Double Nickase (h2): sc-402171-NIC-2
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Pax-2 Plasmide Double Nickase (h2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Pax-2 Double Nickase Plasmid (h2) e il Pax-2 Double Nickase Plasmid (h22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PAX2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Pax-2 Antibody (60-P): sc-130387
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Pax-2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402171-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano PAX2 codifica il fattore di trascrizione Pax-2 contenente il paired box, un regolatore legante il DNA essenziale per il patterning embrionale e la specificazione dei destini cellulari, in particolare nello sviluppo del rene, del tratto urogenitale e del sistema nervoso centrale. Pax-2 controlla programmi trascrizionali dipendenti dal contesto legandosi a siti di riconoscimento del paired box e coordinandosi con complessi della cromatina e co-regolatori per influenzare la differenziazione epiteliale, la morfogenesi e la proliferazione durante l’organogenesi. L’espressione deregolata di PAX2 o alterazioni genetiche sono collegate ad anomalie congenite del rene e delle vie urinarie e sono state associate a stati trascrizionali oncogenici in diversi contesti tumorali, rendendolo rilevante per lo studio delle reti di regolazione genica dello sviluppo e dei meccanismi di malattia. I reagenti per il gene editing di PAX2 consentono knockout e knock-in mirati o la perturbazione di elementi regolatori per interrogare le vie dipendenti da Pax-2, mappare i bersagli a valle e modellare fenotipi associati allo sviluppo e alla trasformazione in cellule umane.
Pax-2 Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PAX2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PAX2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PAX2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PAX2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.