patched/PTCH1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-422471-NIC

Ptch1は、マウスpatched（PTCH1）受容体をコードしており、Hedgehogシグナル伝達経路においてSmoothenedの主要な阻害因子として機能する、12回膜貫通型タンパク質です。SHHなどのHedgehogリガンドが結合すると、PTCH1による抑制が解除され、下流のGLI転写プログラムが活性化して、胚のパターニング、幹細胞・前駆細胞の挙動、組織恒常性を制御します。PTCH1依存的なシグナル制御の破綻は、Hedgehog経路の異常活性化と関連し、発生異常や腫瘍生物学の分野で広く研究されています。そのためPtch1は、マウス系での発生研究や疾患モデリングにおいて、繊毛関連のシグナル伝達、モルフォゲン勾配、発生過程における転写制御を解析するための重要な結節点となります。

patched/PTCH1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Ptch1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Ptch1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Ptch1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Ptch1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。