patched/PTCH1 Double Nickase Plasmid (m): sc-422471-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das patched/PTCH1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- patched/PTCH1 Double-Nickase-Plasmid (m) und patched/PTCH1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Ptch1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: patched/PTCH1: sc-293416
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
patched/PTCH1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-422471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
patched/PTCH1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ptch1 kodiert den Maus‑Rezeptor Patched (PTCH1), ein 12‑fach transmembranöses Protein, das als primärer Inhibitor von Smoothened im Hedgehog‑Signalweg fungiert. Die Bindung von Hedgehog‑Liganden wie SHH hebt die durch PTCH1 vermittelte Repression auf und ermöglicht nachgeschaltete GLI‑Transkriptionsprogramme, die die embryonale Musterbildung, das Verhalten von Stamm‑ und Vorläuferzellen sowie die Gewebehomöostase regulieren. Eine Störung der PTCH1‑abhängigen Kontrolle der Signalübertragung wird mit einer aberranten Aktivierung des Hedgehog‑Signalwegs in Verbindung gebracht und ist Gegenstand umfangreicher Forschung in Entwicklungsstörungen und der Tumorbiologie. Ptch1 ist daher ein zentraler Knotenpunkt zur Untersuchung zilienassoziierter Signaltransduktion, von Morphogengradienten und der Transkriptionsregulation während der Entwicklung sowie in Krankheitsmodellen in Maus‑Systemen.
patched/PTCH1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ptch1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ptch1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ptch1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ptch1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.