parvalbumin α Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401364-LAC

PVALB codifica a parvalbumina α, uma proteína de ligação ao cálcio do tipo EF-hand, de alta afinidade, que atua como tampão do Ca²⁺ intracelular e molda a amplitude e a cinética dos transientes de cálcio. Em células excitáveis, a parvalbumina contribui para a sinalização dependente de cálcio, influenciando processos como a liberação de neurotransmissores acoplada ao potencial de ação e a regulação gênica dependente de atividade. É amplamente utilizada como marcador molecular de populações de interneurônios GABAérgicos de disparo rápido e é frequentemente estudada no contexto da dinâmica de circuitos neuronais e da homeostase do cálcio. A desregulação da expressão de PVALB ou alterações na função de interneurônios positivos para parvalbumina têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, motivando estudos mecanísticos sobre o equilíbrio excitação–inibição e vias reguladas por Ca²⁺.

As Partículas de Ativação Lentivirais parvalbumin α (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PVALB numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais parvalbumin α (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PVALB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de parvalbumin α. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PVALB e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.