PAR-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420267

Visão geral

O gene murino **F2rl3** codifica o receptor ativado por proteases-4 (**PAR-4**), um receptor acoplado à proteína G ativado por proteases de serina, como a trombina, por meio do desmascaramento proteolítico de um ligante ancorado. O PAR-4 acopla-se principalmente às vias de sinalização **Gq** e **G12/13**, promovendo a mobilização intracelular de **Ca2+**, a remodelação do citoesqueleto dependente de **RhoA/ROCK** e respostas a jusante das vias **MAPK** e **NF-κB**, que modulam a ativação plaquetária, a sinalização inflamatória e a homeostase vascular. Em contextos imunes e vasculares, a atividade de F2rl3/PAR-4 contribui para a adesão celular e a regulação de barreiras e é frequentemente estudada em modelos de trombose, inflamação e estresse cardiometabólico. Alterações na sinalização de PAR-4 também foram associadas a sinais do microambiente tumoral, reforçando sua relevância para estudos mecanísticos sobre a interação entre hemostasia e inflamação.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PAR-4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene F2rl3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do F2rl3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do F2rl3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PAR-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de F2rl3 para a investigação da sinalização de PAR-4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) F2rl3 críticos para a função PAR-4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos F2rl3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PAR-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PAR-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus F2rl3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PAR-4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PAR-4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia F2rl3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo F2rl3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.