PAR-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420266

Panoramica

Il gene murino F2rl2 codifica il recettore attivato da proteasi-3 (PAR-3), un membro della famiglia dei GPCR attivato nel contesto della segnalazione mediata da proteasi extracellulari e di segnali associati alla coagulazione. PAR-3 partecipa a reti di recettori attivati da proteasi che possono attivare la segnalazione tramite proteine G eterotrimeriche e coordinare vie a valle che influenzano il flusso di calcio, le risposte MAPK e il rimodellamento del citoscheletro nei tipi cellulari responsivi. Nei sistemi murini, F2rl2 è studiato per i suoi ruoli nella biologia vascolare e infiammatoria, nella segnalazione associata alle piastrine e nella comunicazione stroma–sistema immunitario all’interno dei microambienti tissutali. Una segnalazione deregolata dei recettori attivati da proteasi è rilevante in modelli di trombosi, infiammazione e biologia del cancro, dove un’espressione alterata del recettore o un cambiamento del “tono” di segnalazione può rimodellare la migrazione cellulare e i processi legati alla funzione di barriera.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene F2rl2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del F2rl2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto F2rl2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAR-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di F2rl2 per lo studio della segnalazione di PAR-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni F2rl2 critici per la funzione di PAR-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di F2rl2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAR-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PAR-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus F2rl2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAR-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PAR-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia F2rl2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio F2rl2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.