PAR-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m2): sc-420265-KO-2

概要

F2rl1 はプロテアーゼ活性化受容体2（PAR-2）をコードしており、セリンプロテアーゼによる切断によって“テザードリガンド（結合型リガンド）”が露出して活性化される G タンパク質共役受容体（GPCR）です。これにより Gq/11、Gi/o、G12/13 経路を介したシグナル伝達が開始されます。PAR-2 の刺激は細胞内 Ca2+ 動員を引き起こし、MAPK/ERK および NF-κB カスケードを活性化し、サイトカイン産生、バリア機能の調節、侵害受容感作に関連する転写プログラムを促進します。マウス組織では PAR-2 は上皮・内皮コンパートメント、免疫細胞、感覚ニューロンに広く発現し、炎症反応や組織リモデリング応答を統括します。PAR-2 活性の破綻は、気道および腸管炎症、皮膚炎、疼痛、腫瘍微小環境におけるシグナル伝達のモデルで関与が示されており、プロテアーゼ駆動型の生物学を機構的に研究するうえで有用な標的となっています。

PAR-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）は、mouse細胞株におけるF2rl1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、F2rl1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、F2rl1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAR-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAR-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、F2rl1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAR-2の機能に不可欠なF2rl1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、F2rl1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAR-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPAR-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、F2rl1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAR-2 HDRプラスミド（m）および PAR-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはF2rl1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のF2rl1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。