p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402401

概要

DDX5はp68 RNAヘリカーゼをコードしており、これはDEAD-boxファミリーに属するATP依存性RNAヘリカーゼで、RNAおよびリボ核タンパク質複合体を再構成することで、pre-mRNAスプライシング、リボソーム生合成、マイクロRNAのプロセシングを制御する。p68はまた、シグナル応答性の転写因子と相互作用することで転写共役因子（コレギュレーター）としても機能し、RNA代謝と、細胞周期の進行やストレス応答を司る遺伝子発現プログラムとを結び付けている。これらの働きを通じてDDX5は、ゲノム完全性の維持や、DNA損傷応答とRNAプロセシングの協調に寄与する。DDX5の発現や機能の破綻は、複数の腫瘍において腫瘍性の転写ネットワークやRNAスプライシング環境の変化と関連づけられており、RNA駆動性の疾患表現型の機序研究に有用な標的となっている。

p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDDX5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DDX5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DDX5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、p68 RNA Helicaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、p68 RNA Helicaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DDX5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• p68 RNA Helicaseの機能に不可欠なDDX5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DDX5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびp68 RNA Helicase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DDX5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  p68 RNA Helicase HDRプラスミド（h）および p68 RNA Helicase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDDX5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDDX5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。