p41-ARCb Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405027-ACT

ARPC1B codifica a p41-ARCb, uma subunidade reguladora do complexo Arp2/3 que promove a polimerização ramificada de actina, necessária para a formação de lamelipódios, a endocitose e a remodelação dinâmica do citoesqueleto cortical. Ao acoplar a nucleação de actina a entradas de sinalização, a ARPC1B sustenta processos como a migração celular, a organização da sinapse imunitária e o tráfego vesicular. Alterações na função de ARPC1B estão associadas a respostas dependentes de actina desreguladas em contextos hematopoiéticos e de células imunitárias, tornando-a relevante para o estudo do controlo citoesquelético da inflamação e da defesa do hospedeiro. Assim, a ARPC1B é frequentemente investigada em vias que regulam alterações na forma celular, adesão e sinalização induzida por recetores que dependem da atividade do Arp2/3.

p41-ARCb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARPC1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p41-ARCb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARPC1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARPC1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p41-ARCb. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARPC1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p41-ARCb no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p41-ARCb em células tumorais com expressão de ARPC1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.