Plásmido Doble Nickase (h) p35: sc-400431-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)p35 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa p35 (h) y el plásmido de doble nickasa p35 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CDK5R1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: p35 Anticuerpo (B-1): sc-518009
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) p35 | sc-400431-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) p35 | sc-400431-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK5R1 codifica p35, una subunidad reguladora enriquecida en neuronas que se une a la quinasa dependiente de ciclina 5 (CDK5) y la activa, dirigiendo la actividad quinasa hacia sustratos que controlan la remodelación del citoesqueleto, el crecimiento de neuritas, el transporte de vesículas sinápticas y la migración neuronal. A través de la señalización CDK5/p35, CDK5R1 influye en redes de fosforilación que se entrecruzan con la señalización MAPK, la guía axonal y programas del neurodesarrollo. Un procesamiento desregulado de p35 y una actividad alterada de CDK5 se han asociado con respuestas al estrés neuronal y con eventos de fosforilación aberrantes implicados en mecanismos de enfermedades neurodegenerativas y del neurodesarrollo. En consecuencia, CDK5R1 se estudia ampliamente por su papel en el mantenimiento de la estructura y la función neuronal en condiciones fisiológicas y patológicas.
p35 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDK5R1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDK5R1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDK5R1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDK5R1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.