p35 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400431

概要

CDK5R1 は、神経細胞で多く発現する制御性サブユニット p35 をコードしており、p35 はシクリン依存性キナーゼ 5（CDK5）に結合して活性化することで、膜や神経突起内におけるキナーゼ活性の時空間的な制御を担う。CDK5–p35 複合体は、細胞骨格タンパク質やシグナル伝達タンパク質のリン酸化を介して、神経細胞の移動、軸索ガイダンス、シナプス形成、ならびに活動依存的なシナプス可塑性を協調的に制御し、微小管およびアクチン動態を司る経路と結び付いている。p35 のターンオーバー異常や p25 への変換は CDK5 活性を持続させ、プロテオスタシスを攪乱し得るため、神経変性や興奮毒性ストレスにおける機序の研究で注目されている。CDK5R1 の発現変動や CDK5–p35 シグナルの変化は、てんかん、神経発達に関わる表現型、神経傷害への応答といった文脈でも検討されてきた。

p35 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDK5R1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDK5R1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDK5R1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、p35タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、p35シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDK5R1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• p35の機能に不可欠なCDK5R1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDK5R1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• p35 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびp35 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDK5R1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  p35 HDRプラスミド（h）および p35 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDK5R1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDK5R1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。