p300 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-435902-ACT

マウス Ep300 は p300 をコードしており、p300 は広範に作用する転写コアクチベーター兼リシンアセチル基転移酵素である。p300 はヒストンおよび多様な非ヒストン基質をアセチル化することで、クロマチンのアクセス性と遺伝子発現プログラムを制御する。p300 は、TGF-β/SMAD、Wnt/β-カテニン、核内受容体シグナル、低酸素応答などの経路からのシグナル入力を、タンパク質間相互作用やエンハンサーへの結合を介して統合し、細胞運命の決定、増殖、ストレス応答を形作る。Ep300 の活性は、エンハンサー／スーパーエンハンサーの機能、DNA 損傷応答、炎症性転写ネットワークにも影響し、発生と組織恒常性のエピジェネティック制御の中核を担う。p300 依存的なアセチル化および共活性化の破綻は、がんモデルや炎症状態を含む複数の疾患関連の生物学的状況において観察される、分化の異常や転写プログラムの再配線と関連している。

p300 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ep300の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p300 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ep300 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEp300転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p300の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEp300遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp300依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEp300発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp300経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。