P2Y12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417999

概要

P2RY12は、細胞外ADPを感知してcAMPシグナルを抑制し、下流のPI3K/AKTおよびインテグリンシグナルを介して血小板の活性化・凝集・血栓の安定化を協調的に制御する、Gi共役型GPCRであるプリン作動性受容体P2Y12をコードします。止血にとどまらず、P2Y12は恒常性維持状態のミクログリアを特徴づけるマーカーでもあり、ヌクレオチドに応答した走化性、突起運動、神経免疫サーベイランスを調節します。P2RY12の活性や発現の変化は、異常な血小板反応性や、神経炎症・神経変性の文脈で観察されるミクログリア状態の変化と関連づけられています。これらの特性により、P2RY12はヌクレオチド駆動シグナル、細胞間コミュニケーション、免疫—血管クロストークを解明するための有用な標的となります。

P2Y12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるP2RY12遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、P2RY12内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、P2RY12のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、P2Y12タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、P2Y12シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、P2RY12欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• P2Y12の機能に不可欠なP2RY12エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、P2RY12ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• P2Y12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびP2Y12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、P2RY12遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  P2Y12 HDRプラスミド（h）および P2Y12 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはP2RY12ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のP2RY12標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。