p21-ARC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403677-ACT

ARPC3はp21-ARCをコードしており、p21-ARCはArp2/3複合体の必須サブユニットです。Arp2/3複合体は分岐したアクチンフィラメント網の核形成を担い、細胞移動時のラメリポディア形成、膜の突出、ならびに力の発生を駆動します。RhoファミリーGTPアーゼや、WAVEファミリーおよびWASPファミリーなどの核形成促進因子による協調的な制御を介して、p21-ARCはエンドサイトーシス、貪食、小胞輸送、免疫シナプスの構築といったアクチン依存性プロセスを支えます。Arp2/3を介した細胞骨格リモデリングの攪乱は、上皮形態形成、神経突起の伸長、白血球の運動性に影響を及ぼし、ARPC3の活性が浸潤・転移の生物学でしばしば利用される機構と結び付くことを示しています。主要なアクチン制御因子として、ARPC3は正常状態および疾患関連条件下における細胞形態、接着のターンオーバー、メカノトランスダクションを制御する経路で頻繁に研究されています。

p21-ARC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARPC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p21-ARC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARPC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARPC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p21-ARCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARPC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp21-ARC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARPC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp21-ARC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。