p20-ARC Plasmide Double Nickase (m): sc-426917-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p20-ARC Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il p20-ARC Double Nickase Plasmid (m) e il p20-ARC Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Arpc4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p20-ARC Plasmide Double Nickase (m) | sc-426917-NIC | 20 µg | $410.00 |
Arpc4 del topo codifica p20-ARC, una subunità essenziale del complesso Arp2/3 che guida la nucleazione e la ramificazione dei filamenti di actina per generare reti dinamiche di actina corticale. Attraverso una regolazione coordinata da parte di fattori che promuovono la nucleazione come WASP/WAVE, a valle delle GTPasi della famiglia Rho, p20-ARC sostiene la formazione di lamellipodi, l’endocitosi, il traffico vescicolare e la fagocitosi, contribuendo a definire la polarità e la motilità cellulare. L’alterazione del rimodellamento dell’actina dipendente da Arp2/3 è associata a cambiamenti della funzione delle cellule immunitarie, a una morfogenesi tissutale compromessa e a comportamenti invasivi in modelli cellulari rilevanti per la patologia, rendendo Arpc4 un nodo centrale per l’analisi delle vie del citoscheletro.
p20-ARC Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Arpc4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Arpc4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Arpc4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Arpc4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.