P-cadherin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400507-ACT

CDH3 kodiert P‑Cadherin, ein klassisches Cadherin, das über Adherens Junctions eine kalziumabhängige Zell‑Zell‑Adhäsion vermittelt und die Architektur epithelialer Gewebe reguliert. Durch homophile Bindung sowie die Kopplung an Catenine und das Aktinzytoskelett beeinflusst P‑Cadherin die Zellpolarität, kollektive Migration und die Stabilität von Zellkontakten und greift dabei in Signalwege wie die Wnt/β‑Catenin‑Signalisierung und die epithelial‑mesenchymale Plastizität ein. Eine fehlregulierte CDH3‑Expression ist mit veränderter Adhäsionsdynamik und invasiven Phänotypen in mehreren epithelialen Krebsarten assoziiert, und Keimbahnvarianten wurden mit Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht, die ektodermale Gewebe und das Sehvermögen betreffen. Diese Eigenschaften machen CDH3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung adhäsionsabhängiger Signalgebung, der Gewebemorphogenese und metastasenähnlicher Verhaltensweisen in humanen Zellmodellen.

P-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDH3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

P-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDH3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDH3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen P-cadherin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDH3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von P-cadherin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des P-cadherin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDH3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.