Oxytocin-R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400641-ACT

O OXTR humano codifica o receptor de ocitocina (Oxytocin-R), um GPCR de classe A que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular a sinalização de IP3/DAG dependente de PLCβ, a mobilização de Ca²⁺ intracelular e a ativação de PKC. A sinalização via OXTR influencia a interação (crosstalk) entre as vias MAPK/ERK e PI3K-AKT, moldando programas transcricionais que regulam a contratilidade do músculo liso, a cognição social, a reatividade ao estresse e a comunicação neuroendócrina. Em tecidos periféricos, o OXTR contribui para a fisiologia uterina e da glândula mamária, enquanto no SNC modula a plasticidade sináptica e comportamentos em nível de circuitos. A expressão ou a sinalização desregulada do OXTR tem sido associada a fenótipos neuropsiquiátricos, incluindo traços relacionados ao espectro do autismo, comportamentos associados à ansiedade e alterações no apego social, sustentando estudos mecanísticos em modelos celulares relevantes.

Oxytocin-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OXTR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Oxytocin-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OXTR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OXTR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Oxytocin-R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OXTR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Oxytocin-R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Oxytocin-R em células tumorais com expressão de OXTR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.