Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Ox40 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401326
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ox40 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Ox40, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ox40 Antibody (H-10): sc-376014
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ox40 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401326 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TNFRSF4 codifica OX40 (CD134), un recettore costimolatorio inducibile della superfamiglia dei recettori del TNF, espresso principalmente sui linfociti T CD4+ e CD8+ attivati e su sottopopolazioni di linfociti T regolatori. In seguito al legame con OX40L (TNFSF4), OX40 promuove l’espansione, la sopravvivenza e la formazione di memoria dei linfociti T tramite il reclutamento di adattatori TRAF e la conseguente attivazione delle vie di segnalazione NF-κB, MAPK e PI3K/AKT. Questo asse modula la produzione di citochine, il supporto al centro germinativo e l’equilibrio tra risposte effettrici e regolatorie. Una segnalazione OX40 deregolata è stata implicata nei meccanismi dell’infiammazione cronica e delle malattie autoimmuni, ed è anche rilevante per l’elusione immunitaria e la disfunzione dei linfociti T associata al tumore nella biologia del cancro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ox40 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNFRSF4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNFRSF4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNFRSF4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ox40.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNFRSF4 per lo studio della segnalazione di Ox40, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TNFRSF4 critici per la funzione di Ox40
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNFRSF4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Ox40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ox40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNFRSF4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Ox40 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ox40 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNFRSF4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNFRSF4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.