Ox40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401326

Übersicht

TNFRSF4 kodiert OX40 (CD134), einen induzierbaren kostimulatorischen Rezeptor aus der TNF-Rezeptorsuperfamilie, der vor allem auf aktivierten CD4+- und CD8+-T-Zellen sowie auf Untergruppen regulatorischer T-Zellen exprimiert wird. Nach Bindung an OX40L (TNFSF4) fördert OX40 die Expansion, das Überleben und die Gedächtnisbildung von T-Zellen durch die Rekrutierung von TRAF-Adaptoren und die nachgeschaltete Aktivierung der Signalwege NF-κB, MAPK und PI3K/AKT. Diese Achse moduliert die Zytokinproduktion, die Unterstützung von Keimzentren und das Gleichgewicht zwischen Effektorzellen- und regulatorischen Antworten. Eine fehlregulierte OX40-Signalgebung wird mit Mechanismen chronischer Entzündung und Autoimmunerkrankungen in Verbindung gebracht und ist außerdem für Immunflucht sowie tumorassoziierte T‑Zell-Dysfunktion in der Krebsbiologie relevant.

Das Ox40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TNFRSF4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TNFRSF4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TNFRSF4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ox40-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TNFRSF4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ox40-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TNFRSF4-Exone abzielen, die für die Ox40-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TNFRSF4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ox40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ox40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TNFRSF4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ox40 HDR-Plasmid (h) und Ox40 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TNFRSF4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TNFRSF4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.