Ox40 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401326-ACT

Il gene umano **TNFRSF4** codifica **OX40 (CD134)**, una molecola costimolatoria inducibile appartenente alla superfamiglia dei recettori del TNF, espressa principalmente sulle cellule T attivate, che rafforza le risposte guidate dall’antigene e sostiene la differenziazione verso fenotipi effettrici e di memoria. Il legame di OX40 favorisce il reclutamento delle proteine adattatrici **TRAF** e l’attivazione delle vie di segnalazione **NF-κB**, **MAPK** e **PI3K–AKT**, modulando la produzione di citochine, la sopravvivenza e la proliferazione nell’immunità adattativa. Una segnalazione **OX40–OX40L** deregolata è stata associata a un’alterata tolleranza immunitaria e a programmi infiammatori osservati nell’autoimmunità, nella biologia dei trapianti e nei microambienti immunitari tumorali. **TNFRSF4** è quindi ampiamente studiato nell’attivazione delle cellule T, nei checkpoint di costimolazione e nei modelli di interazione cellula‑cellula del sistema immunitario.

Ox40 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TNFRSF4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ox40 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TNFRSF4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TNFRSF4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ox40. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TNFRSF4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ox40 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ox40 nelle cellule tumorali con espressione di TNFRSF4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.