Ox40 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401326-ACT

ヒトTNFRSF4は、活性化T細胞に主に発現する誘導性のTNF受容体スーパーファミリー共刺激分子であるOX40（CD134）をコードしており、抗原依存的な応答を増強し、エフェクターおよびメモリーへの分化を支える。OX40へのリガンド結合（リガーション）はTRAFアダプタータンパク質のリクルートを促進し、NF-κB、MAPK、PI3K–AKTシグナル伝達を活性化することで、獲得免疫におけるサイトカイン産生、生存、増殖を方向づける。OX40–OX40Lシグナルの制御破綻は、自己免疫、移植免疫学、腫瘍免疫微小環境にまたがって観察される免疫寛容の変化や炎症プログラムの異常と関連づけられている。そのためTNFRSF4は、T細胞活性化、共刺激チェックポイント、免疫細胞間相互作用のモデルにおいて広く研究されている。

Ox40 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNFRSF4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ox40 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNFRSF4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNFRSF4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ox40の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNFRSF4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOx40依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNFRSF4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOx40経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。