OTUD5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424913

Descripción general

Otud5 codifica OTUD5, una desubiquitinasa de la familia de tumores ováricos (OTU) que elimina cadenas de ubiquitina de sustratos proteicos para modular su estabilidad y la salida de señalización. La actividad de OTUD5 se entrecruza con el control dependiente de ubiquitina de las respuestas al daño del ADN, la señalización inmunitaria innata y programas transcripcionales regulados por estrés, determinando cómo las células coordinan la activación de puntos de control y las señales inflamatorias. En modelos de ratón y sistemas celulares, la alteración de la desubiquitinación asociada a OTUD5 puede modificar la proteostasis y el flujo de las vías en procesos vinculados a fenotipos relevantes para el neurodesarrollo y la inmunidad. Estas características hacen de Otud5 un nodo útil para analizar mecanismos de edición de ubiquitina que ajustan la transducción de señales y la integridad del genoma.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO OTUD5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Otud5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Otud5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Otud5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína OTUD5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Otud5 para la investigación de la señalización de OTUD5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Otud5 críticos para la función de OTUD5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Otud5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido OTUD5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido OTUD5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Otud5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR OTUD5 (m) y el plásmido HDR OTUD5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Otud5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Otud5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.