OTUB1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-407665-NIC

OTUB1 (OTU desubiquitinase, ubiquitin aldehyde binding 1) é uma desubiquitinase do tipo protease de cisteína que cliva preferencialmente cadeias de ubiquitina ligadas em K48 e também pode inibir enzimas E2 conjugadoras de ubiquitina, moldando assim os desfechos da sinalização por ubiquitina. Por meio dessas atividades, a OTUB1 regula a estabilidade proteica e a dinâmica de sinalização em vias que controlam as respostas a danos no DNA, a progressão do ciclo celular e a sinalização de estresse, incluindo a modulação de componentes da via do p53 e de eventos de ubiquitinação associados ao reparo. O ajuste, dependente de OTUB1, da proteostase baseada em ubiquitina influencia nós de sinalização imune e inflamatória e pode afetar a degradação de proteínas regulatórias-chave. A expressão ou atividade desregulada de OTUB1 tem sido relatada em múltiplos contextos de câncer e em outros distúrbios nos quais a homeostase da ubiquitina e a manutenção do genoma estão comprometidas, sustentando sua utilidade como alvo mecanístico em pesquisas focadas em vias.

OTUB1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus OTUB1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de OTUB1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função OTUB1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com OTUB1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.