osteopontin/OPN/SPP1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423134-NIC

マウスの Spp1 は、分泌性のリン酸化糖タンパク質であるオステオポンチン（OPN/SPP1）をコードしており、細胞外マトリックスの構成要素としても働いて、細胞接着、遊走、生存の調節に関与します。OPN はインテグリンおよび CD44 と相互作用し、フォーカルアドヒージョンや MAPK/PI3K 関連経路を介したシグナル伝達を協調的に制御することで、白血球のリクルート、マクロファージの活性化、組織リモデリングを形作ります。マウス系では、Spp1 は炎症、線維化、破骨細胞生物学、ならびに転移ニッチのリモデリングにおけるマーカーおよび機構的ハブとして広く用いられています。OPN/SPP1 発現の異常は、慢性炎症性疾患、腫瘍—間質相互作用、骨代謝回転のモデルで頻繁に検討されます。

osteopontin/OPN/SPP1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Spp1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Spp1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Spp1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Spp1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。