osteocalcin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400299

概要

BGLAPは、オステオカルシンをコードしている。オステオカルシンは分泌型でビタミンK依存性の非コラーゲン性タンパク質であり、骨芽細胞によって産生され、骨細胞外マトリックスに沈着することで、骨形成分化の主要なマーカーとなる。オステオカルシンはハイドロキシアパタイトに結合し、ミネラル成熟およびカルシウム恒常性に寄与することで、骨形成プログラムと細胞外マトリックスの組織化を結び付けている。その発現は、RUNX2により駆動される分化や、骨リモデリングを破骨細胞—骨芽細胞間コミュニケーションに連動させるシグナル伝達経路など、骨芽細胞の制御ネットワークと協調して制御される。BGLAP／オステオカルシンの制御異常は、骨代謝回転の表現型、骨格の石灰化異常、ならびに腫瘍—骨微小環境の相互作用の文脈でしばしば研究されている。

osteocalcin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBGLAP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BGLAP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BGLAPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、osteocalcinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、osteocalcinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BGLAP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• osteocalcinの機能に不可欠なBGLAPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BGLAPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• osteocalcin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびosteocalcin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BGLAP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  osteocalcin HDRプラスミド（h）および osteocalcin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBGLAPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBGLAP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。