Orexin R-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402343-ACT

HCRTR2は、神経ペプチドであるオレキシンAおよびオレキシンBのGタンパク質共役受容体であるオレキシン受容体2（Orexin R-2）をコードしており、視床下部の覚醒シグナルを自律神経系および神経内分泌系の出力と統合します。リガンド結合により、Orexin R-2は主にGq/11およびGi/oシグナル伝達に共役して、細胞内Ca²⁺動員、MAPK/ERK活性、ならびに神経細胞の興奮性を調節し、その結果、睡眠・覚醒の制御、エネルギー恒常性、ストレス応答に影響を及ぼします。HCRTR2の活性は、概日リズム生物学、シナプス伝達、ならびに神経炎症に関連した回路リモデリングを司る経路において研究されています。オレキシンシグナル伝達の遺伝学的・機能的な撹乱は、ナルコレプシーなどの睡眠障害や関連する過眠傾向の表現型と関連づけられており、さらに代謝調節異常や神経精神医学的形質との関連という観点からも検討されています。

Orexin R-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HCRTR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Orexin R-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HCRTR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHCRTR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Orexin R-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHCRTR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOrexin R-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHCRTR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOrexin R-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。